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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 24 篇
收稿日期: 2018年11月08日 接受日期: 2018年11月15日 发表日期: 2020年05月18日
分析半枫荷转录组中的 SSR 位点信息,并设计简单重复序列(SSR)引物,以期为半枫荷 EST-SSR分子标记提供有力工具。利用 MISA 工具筛选了半枫荷转录组测序获得的 77 629 条 Unigenes,对其 SSR 位点信息进行了分析;在此基础上利用 Primer 3.0 设计 SSR 引物,并随机选择 50 对 SSR 引物对 4 株不同来源的半枫荷进行多态性扩增分析。在半枫荷的转录组中,共找到 15 041 个 SSRs,分布于 10 669 条 Unigenes,SSR 位点发生频率为 13.74%,含多个位点的序列数为 3 114,占 SSRs 位点总数的 29.19%,以复合形式出现的位点数 2 044 个,占 SSRs 位点总数的 19.16%,SSRs 的平均距离是 3.2 kb。SSRs 位点中二碱基重复是主要类型,占总 SSRs 的 42.17%;其次是单碱基重复基序(38.25%) SSRs。所包含的重复基元中,单碱基重复基元A/T (5 572),二碱基重复基元 AG/CT (4 845)是优势重复基元类型,分别占总 SSRs 的 37.05%、32.21%。利用Primer 3 共设计出 28 590 对 SSR 引物。随机选择 50 对引物进行 PCR 扩增,其中 44 对(88.0%)扩增出清晰、可重复的条带,15 对(34.1%)扩增条带表现出多态性。半枫荷转录组 SSR 位点出现频率高,类型丰富;大量的SSR 为其遗传多样性分析、分子标记辅助育种和遗传图谱构建提供了丰富的候选分子标记。